1、切割质粒和靶基因的限制性内切酶必须是同一种酶才能获得相同的粘性末端，这有利于重组质粒的构建。插入的目的基因只是结构基因部分，其表达需要一个调控序列，所以作为载体的质粒必须在插入位点前有启动子，插入位点后有终止子。

2、通过载体将目的基因片段导入活细胞。基因表达载体的构建是将目的基因与载体连接起来，使目的基因在受体细胞中稳定存在，并传递给下一代，使目的基因得以表达并发挥作用。